绵羊P选择素(SELP)ELISA试剂盒

【原理】

ELISA双抗体夹心法（enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique）的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被检测指标抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

ELISA （Enzyme-Linkedimmunosorbent assay）的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其活性，又保留酶的活力。在测定时，把待测样本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，所以可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。由于酶的催化速率很高，所以可地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

酶联吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶测定技术中应用广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

简介

自从Engvall和Perlman(1971）报道建立酶联吸附试验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为广泛应用的检测方法之一。

如今ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。

间接ELISA

本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。

⑴ 材料

① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；

② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；

③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。

⑵ 方法步骤

① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干

④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液

⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。

⑶ 结果判定　已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。

绵羊P选择素(SELP)ELISA试剂盒

注意事项

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。

5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

7. 底物请避光保存。

8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。