鸡葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)ELISA试剂盒

鸡葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)ELISA试剂盒

酶联吸附法（ELISA）是一种灵敏、特异的学技术，常用于医学、生物领域中的抗原或检测。其使用范围包括：1.临床诊断：ELISA可以用于检测传染病（如、等）、标志物等，协助进行诊断。2.食品安全：ELISA可以用于检测食品中的有害（如残留、兽药残留等），保障食品安全。3.监测：ELISA可以用于评估水质、空气等指标，监测状况。4.生物分子检测：ELISA可以用于检测生物分子，如蛋白质、多肽、等，在生物医学研究领域广泛应用。总之，酶联吸附法在医学、生物领域中具有广泛的应用价值，是临床诊断和中重要的辅助手段。

ELISA试剂盒的实验原理.ELISA试剂盒的实验原理是建立在抗原与学反应的基础上的，同时结合了酶的催化作用。其基本原理包括三个方面：1.抗原或能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其学活性。2.抗原或可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其学和酶学活性。3.酶结合物与相应抗原或结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。ELISA法一方面是建立在抗原与学反应的基础上，因而具有特。而另一方面又由于酶标记抗原或是酶分子与抗原或分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的性。因此，ELISA法是一种既又特异的。

ELISA试剂盒的操作步骤如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。6.洗涤：同上。7.结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h.8.洗涤：同上。9.显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。10.待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定水平。以上步骤仅供参考，具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。

双夹心

本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病（IBDV）的双夹心ELISA为例介绍本法的操作程序。

① 加包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

③ 加酶标 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液

⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

双夹心ELISA

此法与双夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种，还可试验的性。此法的基本程序为：

① 加（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

③ 加用非同种动物生产的特（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

④ 加入酶标抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液

⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。

竞争ELISA

此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射测定。其基本程序为：

① 包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液

④ 用ELISA检测仪测定OD值。

 

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