上海笃玛生物科技有限公司
第8年
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第8年
来源：上海笃玛生物科技有限公司 时间：2024-11-02 09:02:30 [举报]
人线粒体解偶联蛋白1(UCP-1)ELISA试剂盒特强
ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，这些就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
组成结构：
1、 ：操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 ：EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠,EDTA,细胞上清中白介素-6的定量检测
试剂盒成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记和显色剂)
酶联吸附法（ELISA）是一种灵敏、特异的学技术，常用于医学、生物领域中的抗原或检测。其操作步骤如下：1.包被：将抗原或与酶结合，形成酶标抗原或，并固定在固相载体上。2.洗涤：去除未结合的和杂质。3.封闭：加入封闭液，封闭固相载体上未结合的位点，以非特结合。4.洗涤：去除未结合的封闭液和杂质。5.加样：加入待检测的样本，使其与固相载体上的抗原或结合。6.洗涤：去除未结合的样本和杂质。7.加入酶标：使固相载体上的抗原或与酶标结合，将抗原或间接标记上酶。8.洗涤：去除未结合的酶标和杂质。9.显色：加入底物，使酶催化底物生成有色产物，根据颜色反应的程度进行抗原或的定性或定量检测。需要注意的是，具体的操作步骤可能因实验设计、试剂品牌等不同而有所差异。在进行ELISA实验时，应严格按照试剂盒说明书和实验指导手册进行操作，控制好实验条件和操作步骤，以实验结果的准确性和可靠性。
酶联吸附法（ELISA）是一种灵敏、特异的学技术，常用于医学、生物领域中的抗原或检测。其作用包括：1.诊断：ELISA可以用于检测或组织样本中的特定分子，如抗原、抗原、标志物等，协助进行诊断。2.检测：ELISA可以用于检测血液中的，如乙型表面、人类缺陷等，用于流行病学调查和临床诊断。3.评估：ELISA可以用于检测后的以及剂量对的化学反应等，帮助对患者进行个性化。4.生物分子检测：ELISA可以用于检测生物分子，如蛋白质、多肽、等，在生物医学研究领域广泛应用。总之，酶联吸附法在医学、生物领域中具有广泛的应用价值，是临床诊断和中重要的辅助手段。
人线粒体解偶联蛋白1(UCP-1)ELISA试剂盒特强
试验原理
试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
安全性
1． 避免直接终止液和底物A、B。一旦到这些，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃，不可保存。
5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光，避免长时间于光下。避免用手，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11． 加入试剂的顺序应一致，以所有反应板孔温育的时间一样。
12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
人线粒体解偶联蛋白1(UCP-1)ELISA试剂盒特强
做好对照
正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。
实验条件的选择
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1） 固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
（3） 酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。
（4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
ELISA试剂盒检测中的注意事项
1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取时，要用量程和需要量接近的枪去吸，误差。
7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。
8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。
11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免。
15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这样才能数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。
标签：ELISA试剂盒,指标ELISA试剂盒,人ELISA试剂盒,吸附测定法
