公司产品
Company Product-
牛突触体相关蛋白25(SAP25)ELISA试剂盒
来源：上海笃玛生物科技有限公司时间：2024-04-25 [举报]
牛突触体相关蛋白25(SAP25)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒的实验原理.ELISA试剂盒的实验原理是建立在抗原与学反应的基础上的，同时结合了酶的催化作用。其基本原理包括三个方面：1.抗原或能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其学活性。2.抗原或可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其学和酶学活性。3.酶结合物与相应抗原或结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。ELISA法一方面是建立在抗原与学反应的基础上，因而具有特。而另一方面又由于酶标记抗原或是酶分子与抗原或分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的性。因此，ELISA法是一种既又特异的。
酶免ELISA试剂盒是一种常用的学实验技术，常用于抗原或的定量检测。这种试剂盒利用酶联吸附法（ELISA）技术，将已知的抗原或吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA试剂盒具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点，在医学、生物学和化学等领域广泛应用。
标记
良好的酶结合物取决于两个条件：即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要，因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中，的活性有所，故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的，可性，而且可稀释使用，非特吸附。
酶与交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5g纯化的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即酶标，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。
牛突触体相关蛋白25(SAP25)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒的用法包括以下步骤：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.加样：加入已经稀释好的样品，37℃反应1h。一般样本加入50-100μl，充分混匀。6.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶标试剂：每孔加入100μl酶标溶液，37℃，1h。8.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。9.显色：每孔先加入显色剂A液50μl，再加入显色剂B液50μl，37℃避光10-15min。10.终止及测定：加入50μl终止液，终止反应，用酶标仪在450nm波长处测OD值。
酶联吸附法（ELISA）的优点包括：1.高灵敏度：ELISA可以检测出微量的抗原或，其灵敏度通常比其他学更高。2.高特：ELISA仅与特定的抗原或结合，因此不易受到其他的，具有较高的特。3.快速：ELISA操作简便、快速，可以在短时间内结果.4.易操作：ELISA实验操作相对简单，易于化和自动化，因此适合于大规模样品的检测。5.应用范围广：ELISA可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、多肽、等，因此在医学、生物领域广泛应用。6.无放射性核素污染：与放射测定法相比，ELISA不需要使用放射性核素，因此更为安全、环保。总之，ELISA是一种高灵敏度、高特、快速、易操作的学技术，具有广泛的应用前景。效果测定
测定内容包括酶和活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
⑴ 酶与的活性 常用琼脂扩散或电泳法，使抗原与形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定是用系列稀释的酶标直接以ELISA进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标的使用浓度。
⑵ 结合物的定量测定 一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：
酶量（mg/ml）=OD403×0.42
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记量，按下列公式计算：
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62
已知酶量和IgG量后，即可计算出标记的摩尔（mol）比值。
HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4
结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×
用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果，达 1000(g/ml时效。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果，1.5-2.0。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%，达30%以上。
90分钟一步法ELISA试剂盒可以适用于、、组织匀浆、细胞上清液等样本类型。这些样本可以用于检测、和其他微生物等病原体，以及、自身性等病理情况。同时，ELISA试剂盒还可以用于检测浓度、维生素等营养，以及污染物等有害的残留量。需要注意的是，不同样本类型和检测项目可能对ELISA试剂盒的灵敏度和特产生影响，因此在选择使用ELISA试剂盒时需要根据具体情况进行选择。
酶联吸附法（ELISA）是一种灵敏、特异的学技术，常用于医学、生物领域中的抗原或检测。其操作步骤如下：1.包被：将抗原或与酶结合，形成酶标抗原或，并固定在固相载体上。2.洗涤：去除未结合的和杂质。3.封闭：加入封闭液，封闭固相载体上未结合的位点，以非特结合。4.洗涤：去除未结合的封闭液和杂质。5.加样：加入待检测的样本，使其与固相载体上的抗原或结合。6.洗涤：去除未结合的样本和杂质。7.加入酶标：使固相载体上的抗原或与酶标结合，将抗原或间接标记上酶。8.洗涤：去除未结合的酶标和杂质。9.显色：加入底物，使酶催化底物生成有色产物，根据颜色反应的程度进行抗原或的定性或定量检测。需要注意的是，具体的操作步骤可能因实验设计、试剂品牌等不同而有所差异。在进行ELISA实验时，应严格按照试剂盒说明书和实验指导手册进行操作，控制好实验条件和操作步骤，以实验结果的准确性和可靠性。
标签：可定制,人ELISA试剂盒,酶联试剂盒,90分钟一步法责任编辑：杨燕燕
上一条： 下一条：职业照、商业摄影、摄影会议、摄影服务、人像摄影、集体照.
