兔可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒

来源：上海笃玛生物科技有限公司 时间：2024-05-17 11:52:29 [举报]

兔可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒

点ELISA：与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特不够高等。该的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被　取纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使纤维素膜干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭　将纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。⑸显色　加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定　以阳性、阴险作为对照，膜片出现深棕红色点者为阳性反应，否则为阴性反应。

操作注意事项：1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作.5. 所有组分使用前充分摇匀。6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检剂盒、ELISA Kit、酶联试剂盒、酶联吸附测定试剂盒、酶联分析试剂盒、酶剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检剂盒、酶联吸附测定试剂盒等。

ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,全 科研工作者的认可及推崇,在欧美及很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。

Elisa生物试验是一种性高,特强,重复性好的实验诊断。由于其试剂、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在学检验的各领域中。ELISA检剂盒适用于体外定性检测人或中的抗人类(HEV) IgM ELISA检测。

ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,这些就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经 次孵育后,酶结合物就会与 次孵育结合上的HEV IgM相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

用途:

ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其学活性,酶标记的抗原或既保留其学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与中的其他分开。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了反应的结果,使测定达到很高的度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。

然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其学的优点。

产品特点:

一、、灵敏、特异的;

二、的重复性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底度高的固相载体;

四、适用、、组织匀浆液、细胞上清液、等等多种标本类型;

五、节省实验经费。

elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L,则认为回收率为99%。

辣根过氧化物酶：过氧化物酶（HRP）广泛分布于植物中，辣根中含，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的铵溶液。酶蛋白和辅基吸收光谱分别为275nm和403nm。

操作注意事项：1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作.5. 所有组分使用前充分摇匀。6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

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