牛胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酸酶(CAD)ELISA试剂盒-上海笃玛生物科技有限公司

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牛胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酸酶(CAD)ELISA试剂盒

来源：上海笃玛生物科技有限公司时间：2024-12-15 08:27:28 [举报]

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牛胱天蛋白酶的脱氧核糖核酸酶(CAD)ELISA试剂盒

ELISA试剂盒的用法包括以下步骤：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.加样：加入已经稀释好的样品，37℃反应1h。一般样本加入50-100μl，充分混匀。6.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶标试剂：每孔加入100μl酶标溶液，37℃，1h。8.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。9.显色：每孔先加入显色剂A液50μl，再加入显色剂B液50μl，37℃避光10-15min。10.终止及测定：加入50μl终止液，终止反应，用酶标仪在450nm波长处测OD值。

酶联吸附法（ELISA）在多个行业都有应用，特别是在医学和生物技术领域中了广泛应用。以下是一些应用ELISA的行业：1.医学诊断：ELISA被广泛应用于各种和等的诊断，如、、结核病等。在动物检疫方面，ELISA已为广泛采用的，例如用于诊断猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等。2.生物技术研发：ELISA可以用于检测生物分子，如蛋白质、多肽、等，在生物医学研究领域广泛应用。例如，在研发中，ELISA可以用于检测的生物活性、与靶点的结合情况等。3.食品安全检测：ELISA可以用于检测食品中的有害，如残留、兽药残留等，保障食品安全。4.监测：ELISA可以用于评估水质、空气等指标，监测状况。总之，酶联吸附法在医学、生物技术、食品安全和监测等领域都有广泛的应用价值。

标记

良好的酶结合物取决于两个条件：即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要，因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中，的活性有所，故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的，可性，而且可稀释使用，非特吸附。

酶与交联，常用法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟，取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5g纯化的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即酶标，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。

牛胱天蛋白酶的脱氧核糖核酸酶(CAD)ELISA试剂盒

ELISA试剂盒用法

酶联吸附法（ELISA）在多个行业都有应用，特别是在医学和生物技术领域中了广泛应用。以下是一些应用ELISA的行业：1.医学诊断：ELISA被广泛应用于各种和等的诊断，如、、结核病等。在动物检疫方面，ELISA已为广泛采用的，例如用于诊断猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等。2.生物技术研发：ELISA可以用于检测生物分子，如蛋白质、多肽、等，在生物医学研究领域广泛应用。例如，在研发中，ELISA可以用于检测的生物活性、与靶点的结合情况等。3.食品安全检测：ELISA可以用于检测食品中的有害，如残留、兽药残留等，保障食品安全。4.监测：ELISA可以用于评估水质、空气等指标，监测状况。总之，酶联吸附法在医学、生物技术、食品安全和监测等领域都有广泛的应用价值。效果测定

测定内容包括酶和活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。

⑴ 酶与的活性　常用琼脂扩散或电泳法，使抗原与形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定是用系列稀释的酶标直接以ELISA进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标的使用浓度。

⑵ 结合物的定量测定　一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：

酶量（mg/ml）=OD403×0.42

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

对于过碘酸钠氧化法制备的标记量，按下列公式计算：

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

已知酶量和IgG量后，即可计算出标记的摩尔（mol）比值。

HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量

结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×

用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果，达 1000(g/ml时效。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果，1.5-2.0。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%，达30%以上。

90分钟一步法ELISA试剂盒可以适用于、、组织匀浆、细胞上清液等样本类型。这些样本可以用于检测、和其他微生物等病原体，以及、自身性等病理情况。同时，ELISA试剂盒还可以用于检测浓度、维生素等营养，以及污染物等有害的残留量。需要注意的是，不同样本类型和检测项目可能对ELISA试剂盒的灵敏度和特产生影响，因此在选择使用ELISA试剂盒时需要根据具体情况进行选择。

ELISA90分钟一步法的优点主要包括：1.操作简单：该只需要一步操作即可完成，操作简单明了，易于。2.快速：ELISA90分钟一步法可以在短时间内完成，适合于大批量样品的快速检测。3.特高：该采用特定的或抗原进行固定和检测，因此具有较高的特。4.灵敏度高：ELISA90分钟一步法具有较高的灵敏度，可以检测出较低浓度的抗原或。5.重复性好：该的重复性，结果较为。6.安全性高：ELISA90分钟一步法不使用放射性同位素等有害，因此具有较高的安全性。需要注意的是，ELISA90分钟一步法也存在一些缺点，例如可能会受到非特因素的影响，结果不准确。此外，该的试剂成本较高，不适合于小规模样品的检测。

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