酶联吸附实验 (ELISA) 是一种定性或定量检测,使用抗体来结合并测定目的分子。与其他检测相似,可使用单克隆抗体和多克隆抗体来检测分析物(如肽、蛋白、抗体和小分子)。抗体对分析物产生特异性,并且一部分(如辣根过氧化物酶 [HRP])直接或间接偶联抗体,从而提供检测方法并实现可能的信号放大。通过多种ELISA方法和检测化学成份,可以让终端用户调整适当的检测,以解决预计的实验问题。该方法可以用于单份样品检测或高通量筛选。

小鼠腺甘酸激酶1(AK1) ELISA 试剂盒 

直接 ELISA

在直接 ELISA 中,抗原直接结合微孔板表面,随后添加直接偶联的抗体来结合/检测。简而言之,实验步骤的 步便是将抗原固定在微孔板上。 步是添加一种封闭试剂,防止检测抗体出现非特异性结合。接下来,添加直接偶联某种酶(如 HRP)的检测抗体。该检测抗体将结合抗原,并且剩余的抗体会从孔中洗掉。随后添加这种酶的底物,短暂孵育后,通常在一个读板机上测定每个孔的信号。直接 ELISA 的实验步骤有限,可让实验设置整体简化。

直接法优缺点:

优点:1:快速,仅使用一种抗体且步骤较少;2:消除了 抗体的交叉反应性。

缺点:1:一抗的反应性可能受到酶或标签标记的不利影响;2:为每个特定的ELISA系统标记一抗,既费时又昂贵;3:由于标记的抗体密度较低导致较低的灵敏度;4:抗原的固定化不是特异性的,有较高背景干扰。

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间接 ELISA

间接 ELISA 类似于直接 ELISA;但主要的差别在于会通过 偶联抗体来检测结合抗体。实验步骤的 步便是将抗原固定在微孔板上。 步是添加一种封闭试剂,防止结合抗体出现非特异性结合。第三,添加一种抗原特异性结合抗体,短暂孵育后,用缓冲液洗涤板孔,以去除多余的试剂。下一步是“间接”检测,其中添加一种抗体来检测 结合抗体。这种抗体通常偶联某种酶。在孵育和洗涤板孔之后,添加该酶的底物。随后,短暂孵育后,通常在一个读板机上测定每个孔的信号。 抗体通常是一种抗物种抗体。间接 ELISA 的主要优势在于可以使用偶联的 抗体来进行多个实验,前提是在所有不同的实验中使用相同物种的结合抗体。另一个优势是 抗体会放大信号,因为大约 2 个抗体将结合 抗体。随着步骤数量的增加,实验步骤通常会耗时更长,并且更容易出错。此外,背景信号可能会增强,因为所需的试剂数量更多,每一种都可能会出现非特异性结合。

间接法优缺点:

优点:1:可以在一个物种中制备许多一抗,并且可以将相同的标记二抗用于检测;2:由于没有标记,保留了 抗体的 反应性;3:高标记的二抗密度可实现高灵敏度,从而导致信号放大。

缺点:1:二抗可能会发生交叉反应,从而导致非特异性信号;2:这个过程中需要一个额外的孵育步骤

小鼠腺甘酸激酶1(AK1) ELISA 试剂盒 

竞争性ELISA

竞争性/抑制性 ELISA 也称封闭 ELISA,它对干扰预计信号的程度进行定量,以测定分析物的数量。这样做的一个方法是用一种对靶标有特异性的抗体包被平板。靶标可以偶联某种酶,并用于检测。如果实验含有次于 量的检测靶标,则高浓度的未标记靶标会竞争性地结合,从而减弱信号。这类竞争性实验可用来测定某种特异性分析物的水平。

竞争法优缺点:

优点:1:灵敏度高以及灵活性高;2:能测定微量的分析物。

缺点:1:特异性较低;2:需要酶标记的抗原。

<p font-size:14px;"="" style="padding: 0px;margin-top: 0px;margin-bottom: 0px;list-style: none;font-family: 'Microsoft YaHei';font-size: 14px;white-space: normal">ELISA的样本实验准备
在收集样本前都有一个完整的计划,清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的, -71℃冻存备用。标本
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6. 组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

90分钟一步法ELISA试剂盒:
1.,灵敏,特异的抗体
2.稳定的重复性和可靠性
3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高和固相载体
4.适用血清,血浆,组织匀浆液,细胞培养上清液,尿液等多种标本型