鸡微精蛋白β(MSMβ)ELISA试剂盒

鸡微精蛋白β(Mβ)ELISA试剂盒

鸡微精蛋白β(Mβ)ELISA试剂盒

实验原理：试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕获的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有组分使用充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤 1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。 2. 设置品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同浓度的品 50μL； 3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL； 4. 随后品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。 5. 弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。 严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

 鸡微精蛋白β(Mβ)ELISA试剂盒

竞争ELISA：此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射测定。其基本程序为：① 包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。