牛神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒

牛神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒 

试剂盒性能

1. 特高：由于是抗原的特结合，因此试验的特很高，能够排除其他的。

2. 灵敏度高：由于酶的放大作用，使得试验的灵敏度大大，能够检测出微量的抗原或。

3. 操作简便：ELISA试验操作相对简单，容易，适合于大规模样本检测。

4. 适用范围广：可以用于检测各种抗原、和等生物分子。

  

样品收集、处理及保存

1. ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2. ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

 结果判断： 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

实验原理

      试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

 

 

 

 牛神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒

 

操作步骤

 

1)涂层:微孔板的孔涂上捕获或抗原。

2)封闭:孔内加入封闭剂(如牛白蛋白或羧纤维素)，非特蛋

白质结合。

3)样本添加:加入含有未知浓度的目标抗原或的样本。

4)洗涤:去除未结合的。

5)检测添加:加入对特定抗原有特的酶标记检测。

6) 再次洗涤:再次去除未结合的检测。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物产生颜色变化。

8)终止反应:加入终止溶液停止酶的反应(在某些类型的ELISA中需要)。

9) 读数:使用光谱光度计测定每个孔的吸光度(通常是在特定波长下)，吸光度

与样本中抗原或的浓度成正比。

 

 

竞争ELISA：此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射测定。其基本程序为：① 包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。

标本的采集及保存

1.：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

2.：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

3.细胞物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。) 

 

 

 

结果分析

根据试剂盒提供的品浓度及对应的OD值，利用品绘制的曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算待测样品的浓度。

 

 

 

 

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

操作步骤：1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。2. 设置品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同浓度的品 50μL；3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；4. 随后品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。