鸡骨成型蛋白1(BMP-1)ELISA试剂盒
鸡骨成型蛋白1(BMP-1)ELISA试剂盒
间接ELISA:本法主要用于检测。(DVH)的ELISA为例,间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;② DVH包被抗原、酶标抗、阴性及阳性DVH参考;待检鸭;③ ELISA检测仪、加样器、聚微量板。⑵ 步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 30分钟,加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值,并计算出P/N比值。⑶ 结果判定 已知阳性与已知阴性的比值(P/N)≥2.1,而且已知阳性的OD值≥0.4;在上述条件成立的情况下,如果待检与已知阴性的比值(P/N)≥2.1,而且待检的OD值≥0.4,则判为阳性,否则判为阴性。
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,终结果乘以5才是样本终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有组分使用充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误,请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤 1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。 2. 设置品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;品孔各加不同浓度的品 50μL; 3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL; 4. 随后品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测 50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。 5. 弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗 板 5 次(也可用洗板机洗板)。 6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。 7. 所有孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 绘制曲线:在Excel工作表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
免责声明
试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或生物体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担, 本公司概不负责。 严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
鸡骨成型蛋白1(BMP-1)ELISA试剂盒
本试剂盒采用双夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被捕获的包被微孔中,依次加入标本、品、HRP标记的检测,经过温育并洗涤。