牛视网膜母细胞瘤蛋白1(RB1)ELISA试剂盒

来源：上海笃玛生物科技有限公司发布时间：2024-05-05 14:39:20

牛视网膜母细胞瘤蛋白1(RB1)ELISA试剂盒

要求

做好对照

正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。

实验条件的选择

在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

（1）　固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

（2）包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

（3）　酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。

（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

进口分装：

检测范围和灵敏度不同，用量少时，可使用分装，前期是它的长久性不是很好。

试剂盒的曲线

试剂盒的曲线相关系数R≥0.98。

试剂盒重复性好，板内、板间变异系数均＜9 %。

试剂的组份都多给20%的富余量，确保完成48/96孔的检测，避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。

检测及酶结合物的稀释度(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作，实验结果的重复性。

白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种形成,它的特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在的相关关系.例如,报道多种的生长因子为白介素-6, 瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性和自身发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠和细胞基质上清的白介素6 原理此试剂盒运用了两种特,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94的 700 pg/mL 预期用途

ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其学活性，酶标记的抗原或既保留其学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的或抗原）与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与中的其他分开。再加入酶标记的抗原或，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了反应的结果，使测定达到很高的度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定。

HBsAg试剂特点（检测：临床夹心法）：包被为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位，可测得HBsAg变异样品，检测的特（99.98%）检测的灵敏度，应用Parl Ehrich 学说（PEI）HBsAg品，对ad品的灵敏度为0.05ng/ml对ay品灵敏度为0.025ng/ml

操作：

双夹心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3.　加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

间接法

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

6.一遍用DDW洗涤。

其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。

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